Ero sivun ”Polymeraasiketjureaktio” versioiden välillä

[katsottu versio][katsottu versio]
Poistettu sisältö Lisätty sisältö
p kh
p kh
Rivi 7:
== Historia ==
 
Ensimmäisen PCR:n kaltaisen menetelmän kuvasi norjalainen [[Kjell Kleppe]] tutkimusryhmänsä kanssa jo vuonna 1971, jolloin Kleppe julkaisi yhdessä Nobel-palkitun [[H. Gobind Khorana]]n kanssa artikkelin ''Repair replication of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases'' ''[[Journal of Molecular Biology]]ssa''. Artikkelissaan he käytännössä kuvasivat PCR:n perusteet. Artikkeli perustui Kleppen kokeisiin, joissa hän oli ensin kaksin- ja sitten nelinkertaistanut pienen synteettisen DNA-pätkän kahden [[aluke (molekyylibiologia)|alukkeen]] ja [[DNA-polymeraasi]]n avulla.<ref>{{Lehtiviite|Tekijä=Kleppe, K., Ohtsuka, E., Kleppe, R., Molineux, I. & Khorana, H.G.|Vuosi=1971|Otsikko=Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases|www=http://dx.doi.org/10.1016/0022-2836(71)90469-4|Julkaisu=Journal of Molecular Biology|Vuosikerta=56|Sivut=341-361341–361|Kieli={{en}}}}</ref> Kleppen työ jäi kuitenkin vähälle huomiolle ja vasta [[Kary Mullis]] ja hänen työtoverinsa [[Cetus Corporation]]issa kehittivät menetelmää niin pitkälle, että PCR-tekniikasta tuli laboratoriotyöskentelyn arkea.<ref>[http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471142720/cp/cpmb/article/mb1501/current/pdf ''Current Protocols'', s. 15.1.6]</ref> Kary Mullis sai vuonna 1983 aloittamastaan työstä [[Nobelin kemianpalkinto|Nobelin kemianpalkinnon]] vuonna [[1993]].<ref>{{Verkkoviite | Osoite =http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/1993/mullis-autobio.html | Nimeke =Kary B. Mullis – Autobiography | Tekijä =Mullis, K.B. | Tiedostomuoto = | Selite = | Julkaisu = | Ajankohta =2005 | Julkaisupaikka = | Julkaisija =The Nobel Foundation | Viitattu =5.11.2007 | Kieli ={{en}} }}</ref>
 
== PCR:n osat ==
 
PCR-reaktion tilavuus on useimmiten hyvin pieni, noin 10–150 μl. Useimmiten monistettavan alueen koko on alle 10 [[emäspari|kbp]], mutta reaktion komponentteja muuttamalla myös jopa 40 kbp:n mittaisten alueiden monistaminen on mahdollista.<ref>{{Lehtiviite |Tekijä=Cheng, S., Fockler, C., Barnes, W.M. & Higuchi, R.|Vuosi= 1994|Otsikko=Effective amplification of long targets from cloned inserts and human genomic DNA|Julkaisu=Proceedings from the National Academy of Sciences|Vuosikerta=91|Sivut=5695-56995695–5699|www= http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=AbstractPlus&list_uids=8202550|www-teksti = Artikkelin tiivistelmä}}</ref> Yksinkertaisimmillaan tavallinen PCR-reaktio sisältää seuraavat osat:<ref name="cp 15.0.1" /><ref name="mc 8.4-8.6">{{Kirjaviite | Tekijä=Sambrook, J. & Russel, D.W.|Vuosi=2001|Nimeke=Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3<sup>rd</sup> edition|Julkaisija = Cold Spring Harbor Laboratory Press|Julkaisupaikka = Cold Spring Harbor, N.Y.|Tunniste = ISBN 0-87969-576-5 |Kappale = Chapter 8: In vitro Amplification of DNA by the Polymerase Chain Reaction|Sivu=8.4-84–8.6 (27-2927–29)|www=http://www.realread.com/pageview/browse.cgi?site=97499611&book=0879695773}}</ref>
 
* Templaatti-DNA